PCR擴增試劑盒可檢測低至10ng的人基因組DNA
瀏覽次數:10發布日期:2025-12-26
PCR擴增試劑盒憑借其高效、準確、便捷的特點,已成為生命科學研究和臨床診斷中不可少的工具。
PCR擴增試劑盒的優點:
1.高靈敏度:可檢測低至10ng的人基因組DNA,甚至達到10cfu/ml的細菌濃度,適用于早期診斷。
2.高特異性:通過特異性引物設計,結合熱穩定DNA聚合酶的準確延伸能力,能夠準確識別目標序列,減少非特異性擴增。特殊處理的探針技術進一步強化了識別能力,確保檢測結果的可靠性,避免假陽性干擾。
3.操作簡便:預混試劑和即用型設計簡化了實驗流程,減少人工配制環節。一體化的試劑體系降低了操作難度,使非專業人員也能獲得一致的實驗結果。
4.快速高效:整個檢測流程只需3小時,可在2-3小時內完成96個樣品的定量分析,提升檢測效率。
5.穩定性強:通過凍干工藝和特殊穩定劑的應用,PCR檢測試劑盒實現了常溫儲存和長時間保存。優化后的凍干粉劑型不僅方便運輸,還能在恢復溶液后保持原有性能,降低因儲存條件導致的性能衰減風險。
6.自動化與安全性:部分試劑盒采用閉管檢測設計,無需后期處理,防止污染;熒光定量PCR技術更可實現實時監測,減少放射性物質的使用。
PCR擴增試劑盒的測定步驟:
1.準備工作
-確保所有需要使用的儀器設備都已準備就緒,包括熱循環儀、微量移液器以及離心機等。同時,仔細閱讀試劑盒提供的說明書,了解每個成分的具體用途和推薦的工作濃度。
2.樣本處理
-根據實驗目的選擇合適的樣本類型(如血液、組織切片或環境樣本),并按照說明書指導進行預處理。
3.配制反應體系
-根據試劑盒說明書的要求,配制PCR反應體系,包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等成分。這些成分需要按照特定的比例和順序加入到反應管中。
4.加樣
-將提取的DNA加入到PCR反應體系中。
5.進行PCR反應
-設定好熱循環儀的反應條件,包括變性、退火、延伸三個步驟,每個步驟需要特定的溫度和時間。反應次數通常為25-35個循環。
6.結果分析
-待測樣本與標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數,計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值,即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。